闫妮出生于西安的工人家庭,作为家中幼女,她的成长与艺术结缘。1986年,闫妮家迁至西安电影制片厂附近,受周围氛围影响,报考艺术学院的风气在她就读的西安第四十五中学十分浓厚。1988年,她考入陕西财经学院工业经济系企业管理专业,却对该专业兴趣寥寥。两年后,兰州军区政治部战斗话剧团来西安招生,闫妮成功考上,就此开启演艺之路。1990年9月,她入伍成为文艺兵,同年11月被送往解放军艺术学院表演系学习。此后,她经历丰富,1993年参与中日文旅游电视片录制,1994年参演话剧《第12夜》,1994年底加入空军政治部电视艺术中心,虽初期多是龙套角色,但为她积累了宝贵经验,1999年,她正式开启演艺生涯。
1999年,闫妮在电影《公鸡打鸣,母鸡下蛋》中首次担纲女主角,饰演女村长,其喜剧才华被导演尚敬发掘,受邀客串《炊事班的故事》。2003年,她参演尚敬执导的电视情景轻喜剧《健康快车》,饰演护士严文秀 。2005年,闫妮凭借古装情景喜剧《武林外传》中佟湘玉一角一夜成名,火遍全国。此后,她演艺事业高歌猛进:2007年出演《大明王朝1566》,饰演裕王李妃;同年主演电影《追爱总动员》。2009年,《北风那个吹》让她名声大噪,凭借牛鲜花一角两年内斩获六大电视剧盛典最高奖项,并荣获中国电视剧飞天奖和金鹰奖;同年,她主演张艺谋执导的《三枪拍案惊奇》,饰演风情老板娘,还因此踏上柏林电影节红毯。2010年,闫妮佳作不断,主演多部电视剧,还参演电影版《武林外传》 。
2011年,闫妮在电影领域成绩斐然,主演《最强喜事》《画壁》《大魔术师》《开心魔法》等影片,票房均过亿,被媒体誉为华语影坛性价比最高的演员之一。2012 - 2015年,她持续发力,主演《亲爱的》《婚姻料理》《形影不离》《女子军魂》《一仆二主》《生活启示录》《王大花的革命生涯》《前夫求爱记》《捉妖记》《青春集结号》等众多影视作品,塑造了各式各样的经典角色。
2016 - 2017年,闫妮不仅参演多部电影,如《过年好》《反转人生》《罗曼蒂克消亡史》《情圣》《美容针》,还在电视剧领域表现出色,主演《爱的追踪》《太太万岁》《复合大师》《绝密543》 。2018 - 2020年,她多次登上央视春晚舞台,表演小品;主演《少年派》,凭借王胜男一角获得多个奖项提名与荣誉;参演《我和我的家乡》《装台》《山海情》等口碑佳作 。
2021 - 2022年,闫妮继续活跃在影视综领域,参演《小幸福》《迷妹罗曼史》《亲爱的爸妈》《突围》《开播!情景喜剧》《少年派2》《我们这十年》等作品 。2023 - 2025年,她主演《学爸》《最后的真相》《再见,李可乐》《小巷人家》《真心英雄》等影视,还多次出席重要活动、参加综艺节目,在2025年央视春晚与殷桃等人演唱歌曲《假如》,演艺事业持续高光。
在个人生活中,闫妮曾有过一段婚姻,育有女儿邹元清。2004年,二人离婚,这段经历直至2011年才被公开。此外,闫妮热心公益,2010年为玉树地震灾区捐款10万元,2015年亮相芭莎明星慈善夜,展现出强烈的社会责任感。